Microscopie à expansion de cryosections de testicules de drosophile pour démasquer les modifications post-traductionnelles de la tubuline – François Juge (IGH – Montpellier)

Résumé :

Notre groupe s’intéresse aux rôles des modifications post-traductionnelles (MPTs) des protéines α- et β-tubulines qui constituent les microtubules. Une de ces modifications est la détyrosination de l’α-tubuline qui consiste à cliver le dernier acide aminé de la queue C-terminale exposée à la surface des microtubules. Chez les mammifères cette modification est présente dans toutes les cellules et est réalisée par deux familles d’enzymes. De manière intéressante, chez la drosophile la détyrosination est présente uniquement au cours de la spermatogenèse, en particulier sur l’axonème des spermatozoïdes, et est catalysée par une enzyme différente que nous avons identifiée récemment dans notre équipe.

En analysant la distribution de différentes MPTs sur les axonèmes chez la drosophile par immunomarquage, nous avons observé une disparition de la détyrosination au cours de la spermatogenèse en raison d’un masquage d’épitope. Afin de résoudre ce problème et d’analyser la distribution des MPTs des tubulines à haute résolution, nous avons combiné la méthode de cryosection et la microscopie d’expansion afin d’obtenir des coupes transversales d’axonèmes. La microscopie d’expansion permet d’agrandir artificiellement un échantillon biologique, qui est inclus dans un gel, afin d’augmenter la résolution d’imagerie. Notre méthode permet d’agrandir 9 fois la taille des échantillons, permettant de discerner la structure des axonèmes, et démasque les épitopes qui étaient inaccessibles en immunomarquages classiques. Cette méthode facilite l’analyse des tissus épais en microscopie d’expansion et devrait être applicable à tout type de cryosections.